獭兔大肠杆菌与肠型球虫混合感染的诊治方法,

个体养鸡户王某,从孵化站购进雏1000只,当饲养到6月27日时,鸡群中有一部分出现了不食、精神不振、排黄白色或淡绿色稀便,有时还排血便等症状。在两周之内其死亡498只,死亡率达49.8%,经临床症状、剖检变化、实验室诊断,确诊为28日龄鸡发生禽霍乱和球虫病混合感染。 1 临床症状

2002年5月,山东省莱州市朱由镇一獭兔饲养户,引进160只3月龄獭兔,发生以排胶冻样和水样粪便、腹部发黑、结膜苍白、消瘦和痉挛死亡为特征的疾病,我们根据观场调查、临床诊断、剖解、实验室诊断,确诊为大肠杆菌与球虫混合感染,情况如下:

我市某养鸡专业户养有3000只肉,实行地面育雏。据户主讲:7日龄接种了新城疫IV系疫苗,8~10日龄在饮水中加入0.005%的恩诺沙星,13日龄接种了传染性法氏囊病疫苗,16日龄脱温分群。两天后,发现个别鸡只精神沉郁,羽毛松乱,头下低,两翅下垂,不愿走动,“叽叽”叫,闭目打盹,肛门周围粘着白色的粪便。于是,挑出单独饲喂,过两天死了5只,又发现个别鸡只肛门周围有血色黏液,严重的可见红色血样粪便。随后几天,仍有死亡,累计死亡了30只,死亡率达10.2%。 1 临床症状 从18日龄开始发现个别鸡只拉白色粪便,白色水样黏液附在肛门周围,过两天发现有血样粪便,整个鸡群精神不佳,采食量下降,饮水量大增。 2 病理剖检 剖检10只病鸡,可见肝脏明显肿大、充血,呈黄色条纹,表面可见散在或弥漫性的针尖大小红点;有坏死灶,质地脆,易破。脾脏明显肿大,较正常大2~3倍,表面有灰白色结节。心包膜增厚,呈黄色,心包积有稻草色的液体。肺上有大小不一的坏死灶;肠道有卡他性炎症,内容物稀薄。盲肠明显肿大、臌气,肠壁内有大量出血点,内容物呈凝血块或棕色血样物。肾脏明显肿大。法氏囊等其他脏器均未见异常。 3 实验室诊断 3.1 取病鸡盲肠内容物直接涂片镜检,可见球虫卵囊。 3.2 细菌检查:取病鸡肝血涂片,革兰氏染色,镜检可见革兰氏阴性小杆菌。 3.3 细菌培养:无菌操作取病鸡肝、脾接种于麦康凯和S.S培养基上,经37℃恒温培养24小时,麦康凯培养基上出现针尖大圆形半透明菌落;在S.S培养基上长出无色透明圆整光滑、带黑色的菌落。 根据临床症状、病理剖检、实验室诊断,确诊为鸡白痢与球虫病混合感染。 4 防治措施 4.1 在饲料中加入0.05%痢特灵,同叫补充维生素C、维生素K。 4.2 在饮水中加入球清,按100克兑水200千克,混合均匀后自由饮水。 4.3 对严重者,单独饲喂,并每只注射5万单位青霉素钾,一天1次,连用3天。 4.4 及时更换垫料,加强消毒。 采取以上措施3~4天后,基本控制了病情,鸡群状况良好,没有再出现拉血样粪便,采食恢复正常。 作者单位:河南省商丘市畜牧局

溃疡性肠炎是由鹑梭状芽孢杆菌引起的和鹌鹑的一种细菌性疾病,主要发生在4一12周龄的幼禽。病死禽以肝、脾坏死,肠道出血、溃疡为主要特征。2004年1月太原市某鸡场产蛋鸡群发现了该病,经过发病情况调查、临床剖检及实验室诊断而确诊.采用敏感药物治疗后病情得到控制。1. 发病情况 太原市某鸡场饲养海兰褐商品蛋鸡700只,45周龄时个别鸡只开始死亡,整个鸡群精神较好,采食量无明显下降,看不到明显症状,只是个别鸡只嗉囊充盈,伴有白色水样下痢,胸肌萎缩,最后因极度消瘦而死。该病表现为散发,病程较长,共死亡32只,死亡率为4.8%。2. 剖检病变 剖检病死鸡,可见嗉囊充盈及肌胃中充满食物;肝脏肿大,呈浅土黄色,表面有大小不一的黄白色坏死斑点;脾脏肿大呈紫黑色:十二指肠肠壁增厚,浆膜面和黏膜面有出血点和出血斑.并与周边组织界限明显:空肠和回肠黏膜上有散在枣核状溃疡灶,溃疡深达肌层,上覆一层伪膜;盲肠扁桃体坏死、脱落。直肠黏膜有密集粟粒状突出于表面的出血溃疡。其他内脏器官无明显病变。3. 实验室诊断3.1压片镜检 无菌采取坏死肝组织,用两张玻片作肝组织压片。火焰固定,革兰氏染色后镜检,可见革兰氏染色呈阳性,内生芽孢的大杆菌。3.2 细菌分离培养 无菌采集病死鸡肝脏、脾脏,划线接种于普通营养琼脂培养基和色氨酸磷酸琼脂培养基,普通营养琼脂培养基在37℃下培养24小时观察无细菌生长。色氨酸磷酸琼脂培养基放入厌氧罐内,在37 qC下恒温培养24小时后观察,可见白色、圆形、隆起、半透明菌落。涂片、染色、镜检,菌体形态与压片所见相同。3.3 生化特性 挑选典型菌落接种糖发酵管发酵葡萄糖、蔗糖、甘露糖、果糖、麦芽糖和棉籽糖,产酸产气,不发酵乳糖、鼠李糖、山梨醇,不液化明胶,不产生吲哚和亚硝酸盐。3.4 药敏试验该菌对氯霉素、链霉素高敏,对痢特灵、恩诺沙星、环丙沙星中敏,对青霉素、新诺明不敏感。3.5 鉴别诊断注意与球虫病、坏死性肠炎、组织滴虫病的鉴别诊断。①球虫病。球虫病不引起肝的灶性坏死以及脾的肿大和出血,当有这些病变伴发于盲肠和其他部分肠管出现溃疡。并在肝涂片的染色标本中发现杆菌和芽胞时,即可作出溃疡性肠炎的诊断。②坏死性肠炎。该病由魏氏梭菌引起.与溃疡性肠炎是两种不同的症候群,但症状十分相似。病死鸡以小肠后段黏膜坏死为特征。肝组织涂片中,溃疡性肠炎病料可见到菌体和芽孢,而发生坏死性肠炎时仅见有菌体。给健康鸡饲喂溃疡性肠炎病鸡的粪便或肠混悬液.可引起人工感染,而坏死性肠炎以同样方法不能引起鸡人工感染。③组织滴虫病。感染组织滴虫后,盲肠壁增厚和充血,渗出物常出现干酪化,形成千酪样的盲肠肠心,在肝内形成不同大小的坏死区。取肝或盲肠内容物作病原学检查.病料用加温至40℃的生理盐水稀释后,作成悬滴标本,在显微镜旁放置一个白热的小灯泡加温.即可在显微镜下见到能活动的组织滴虫。溃疡性肠炎的特征是出现肿大和出血的脾以及肠管溃疡。4. 治疗 全群采用TMP 0.2%的氟苯尼考饮水,每天饮水3次,连饮5~7天:饲料中添加多维,连喂5~7天。同时加强通风换气和消毒。采取上述措施5天后全群没有出现死亡病例.病情得到了控制。5. 讨论5.1通过发病表现、剖检特征、培养特性和生化特性确诊为鸡溃疡性肠炎。鸡溃疡性肠炎系由肠道梭状杆菌引起。

病鸡表现精神萎顿,食欲不振,重者光喝水而不食。排黄白色或淡绿色稀便,有时还排血便。病程较长的病鸡下肢和翅膀出现麻痹。 2 剖检变化

1 现场调查

共剖检8只病死鸡,出现相同的病理变化:心外膜及心冠有小出血点,肝脏发黄质脆,有的肝脏有针尖大灰白色坏死灶。腹膜、皮下、肺脏有出血点,盲肠显着肿大,可为正常的3~5倍,盲肠内充满暗红色血液,盲肠上皮变厚,有时盲肠内有坚硬的凝固物。其肠壁严重糜烂,也有的一侧盲肠病变严重另一侧病变较轻。

该兔场由于引种前准备不充分,兔饲养在三层水泥制的老兔舍,由于底板缝隙小,而且缝隙仅中央部分有,大部分兔粪便都堆积在兔窝角落,每窝饲养2~3只,兔体被毛污浊,地面潮湿,兔舍窗小,通风不好,整个兔舍粪尿味刺鼻。据畜主讲,刚引进来10天内,兔群并无异常,正准备迁到新建兔舍时有20只兔死亡,根据经验用了一些药物,但病情继续发展。

3 实验室诊断 3.1 显微镜检查

2 临床症状

用心血涂片,美兰染色镜检发现大量两极浓染的小杆菌。用肝脏切面触片,用美兰染色,镜检发现有两极浓染的小杆菌。用盲肠脱落的粘膜涂片各加1滴甘油和水,复盖玻片,镜检发现大量不同发育阶段的球虫卵囊。取病鸡粪便5g加2%重铬酸钾溶液10mL,在培养皿中混合,放于25°C温箱培养7天,用吸管吸取培养物一滴置载玻片,加盖玻片镜检发现宽卵圆形,一端稍尖的,也有椭圆形的原生质呈淡褐色,囊壁为淡绿黄色的球虫卵囊,卵囊内有胞子囊,胞子囊内有子胞子。因此,根据卵囊的形状特点,确诊为柔嫩艾美耳球虫。 3.2 组织培养

病兔体温正常或低于正常体温,精神沉郁,被毛粗乱,脱水,消瘦,贫血,腹部膨胀,剧烈腹泻,肛门和后肢的被毛附着大量明胶样和两头尖的粪污。病兔四肢发冷,经常磨牙,流涎。病程长短不一,有的无症状很快死亡;有的突然侧身倒地,肌肉痉挛,头后仰,发出惨叫,迅速死亡;病程稍长的脱水、消瘦、贫血,最后衰竭死亡。

采取濒死期病鸡心血,经分离培养于血液琼脂平板培养基上,经24小时,培养基上长出露滴状、表面光滑的小菌落,取此菌落进行纯培养,用纯培养物制成乳剂,接种于5只小白鼠,另用2只小白鼠不接种作对照,接种的5只小白鼠均在18~22小时后死亡,将死亡小白鼠剖检,用其心血和肝脏分别涂片,美兰和革兰氏染色镜检发现许多呈卵圆形,短杆状革兰氏阴性小杆菌,确定为多杀性巴氏杆菌引起了禽霍乱。 经实验室以上检验,在同一只鸡在其心血查到巴氏杆菌,在其盲肠粘膜上皮查到柔嫩艾美耳球虫卵囊,因而最后确诊此群28日龄鸡混合感染禽霍乱和球虫病。

3 剖检病变

对病死的13只兔进行了剖检,发现大部分肠黏膜发炎,有的有出血点或淡黄色的结节。胃膨胀,胃黏膜发炎,充满多量液体和气体;十二指肠充满染有胆汁的黏液样的液体;空肠扩张,内有半透明胶水样液体;回肠内容物呈现黏胶样,粪球细长,两头尖,外面包有黏稠液或灰白色胶冻样分泌物;结肠扩张,有透明胶样黏液;直肠有大量的胶冻样液体,黏膜与浆膜充血,有出血斑点;大部分病例盲肠尤其是蚓突有大量淡黄色的结节。部分病例胆囊胀大,肝脏、心脏有小点坏死灶。膀胱积有黄色混浊尿液,膀胱黏膜脱落。

4 实验室诊断

4.1 涂片镜检

用病死兔肝脏、心血、结肠内容物,分别涂片,革兰氏染色,镜检,发现有单个或呈短链状排列、两端钝圆的短杆菌,无荚膜和芽孢,有鞭毛,有运动性,革兰氏阴性。

剪开盲肠,在结节性病灶处刮取少量肠黏膜,置于载玻片上,滴加1滴甘油饱和盐水,调和均匀,加上盖玻片,进行镜检,发现有许多艾美球虫卵囊存在。

4.2 分离培养

无菌粘取或钩取新鲜病死兔的肝脏、心血、结肠内容物,用划线法接种于普通琼脂平板培养基上,37℃恒温箱中培养24小时,挑选单个圆形、微隆起、湿润半透明的灰白色的小菌落进行纯培养(www.nczfJ.com/)。将挑选的菌落分别接种到普通琼脂培养基和肉汤培养基上,37℃恒温箱中再培养24小时,得到纯培养物。普通琼脂培养基上长出圆形、微隆起、湿润半透明的灰白色的菌落;肉汤培养基生长丰盛,肉汤变得异常混浊并形成淡灰色沉淀。将得到的纯培养物抹片、革兰氏染色、镜检,其细菌的形态大小与镜检结果相同。

生化试验:用得到的细菌纯培养物做生化试验,结果是能产生靛基质,不分解尿素,不产生硫化氢,不液化明胶,M.R.试验阳性,V-P阴性。能发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇,并能产酸、产气。

动物实验:选健康无病的实验用小豚鼠12只,分甲、乙两组,甲组为实验组,乙组为对照组。甲组用培养24 小时的肉汤培养物0.3mL/只腹腔注射;对照组用无菌生理盐水0.3mL/只腹腔注射,然后进行观察。两天后实验组开始有发病表现,第3天死亡4只,最后一只第5天死亡。对照组无发病。取病死小豚鼠的肝脏、心血、腹水分别涂片,革兰氏染色后镜检,镜检结果与上述检验相同。

根据以上各种检验结果,可确定獭兔已被大肠杆菌感染。由于当时条件有限,不能鉴定大肠杆菌的血清型。

4.3 粪便球虫卵囊的检查

涂片镜检:在载玻片上先滴1滴50%的甘油水溶液,放入火柴头大小的新鲜病兔粪便,用竹签加以涂抹,去掉硬固物,盖上盖玻片,显微镜下镜检。共做抹片5张,其中3张视野中有多个艾美耳球虫卵囊存在。为确诊用漂浮法检查。

粪便漂浮法虫卵检验:取多个病兔的新鲜粪便共2Og,放在玻璃杯中,用玻璃棒将兔粪捣烂,加入100mL饱和生理盐水,再将此粪液用双层纱布过滤到另一个烧杯中,滤液静置30分钟左右,如果有球虫卵囊就会浮到液面上来。用 1Omm 左右的小铁丝圈,平着接触液面,沾取一层水膜,抖在载玻片上,盖上盖玻片,显微镜下观察,发现有大量的艾美耳球虫卵囊存在。

实验结果表明,獭兔感染了大肠杆菌,同时也被艾美球虫所感染。

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