临床快速药敏实验在疫病防控中应用,药敏实验

随着畜牧产业的不断发展,各种细菌性疾病给养殖业造成经济损失的问题日显突出,阻碍了养殖业的快速发展。使用抗生素防治细菌性疾病成为经常性工作,但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗生素,造成细菌产生耐药性问题正变得越来越突出,不少菌株可耐受多种抗生素。因此而造成的危害十分严重,它不仅使抗菌药的疗效降低,疗程延长,还使死亡率升高和治疗费用增加,给养殖业带来巨大经济损失。耐药菌株还可能将耐药性基因由动物转移给人类,对人类健康造成潜在威胁。因此,畜牧生产中应合理使用抗生素,来避免或减少耐药性的产生。

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摘 要: 随着水产养殖精养程度的提高,水环境恶化和滥用抗生素等多方面原因,细菌性渔病频发,且呈现出发病快、来势猛,高死亡率的特点,给渔民造成了巨大的经济损失。笔者设计了一种以LB培养基为基础的快速药敏试验方法,旨在指导渔民准确、及时的对症用药,尽可能减少经济损失;通过反复实践证明,应用该方法一般快则能在4-5h出试验结果,慢则7-9h出试验结果,且试验重复性好,适合于基层推广应用。

一.如何快速选择病原菌敏感的药物

随着畜牧产业的不断发展,各种细菌性疾病给养殖业造成经济损失的问题日显突出,阻碍了养殖业的快速发展。使用抗生素防治细菌性疾病成为经常性工作,但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗生素,造成细菌产生耐药性问题正变得越来越突出,不少菌株可耐受多种抗生素。因此而造成的危害十分严重,它不仅使抗菌药的疗效降低,疗程延长,还使死亡率升高和治疗费用增加,给养殖业带来巨大经济损失。耐药菌株还可能将耐药性基因由动物转移给人类,对人类健康造成潜在威胁。因此,畜牧生产中应合理使用抗生素,来避免或减少耐药性的产生。

由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药,细菌的耐药性问题正变得越来越突出,不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重,它使得抗菌药的疗效降低,疗程延长,死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失,而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类,对人类健康也造成潜在威胁。因此,临床上应合理应用抗菌药,以避免或减少耐药性的产生,而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药,以充分发挥抗菌药疗效,并尽可能减少其不良影响。

关键词:细菌性疾病 药敏试验 K-B法 LB培养基 快速

1.1实践证明,快速药敏实验可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性,指导临床合理用药、灵活选药。可以在本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物,既能缩短病程,又能避免盲目用药,减少费用。

一.如何快速选择病原菌敏感的药物

一、什么是药敏试验?

随着水产养殖业的不断发展,养殖密度过大、环境恶化和其它多种原因导致细菌性疾病日益增多。近几年来,由于养殖户忽略对疾病的正确认识而盲目滥用抗生素,包括用药不当和剂量不准确等情况,增加了细菌的耐药性,使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差,不但造成药物浪费,更为严重的还延误病情。也有一些养殖人员能对疾病做出正确诊断,但在对症下药时却很难凭经验做出判断,在这种情况下,对致病菌做药敏试验是最科学的方法。但是如果按照传统方法进行细菌鉴定和药敏试验,需要很长时间,尤其是细菌鉴定从一开始的细菌分离到最后的动物回归确诊,至少需1周~2周时间,但对农户来说一旦鱼发病了,时间是很宝贵的,早用一天药就减少一天的损失。

1.2因为快速药敏实验在体外进行,操作相对简单,成本相对较低,既经济又快速有效,可以对流行病学调查进行监控,控制和预防耐药菌株的流行。

1.1实践证明,快速药敏实验可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性,指导临床合理用药、灵活选药。可以在本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物,既能缩短病程,又能避免盲目用药,减少费用。

抗菌药物敏感性试验,简称药敏试验,是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验,测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用,以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁,有助于经验性治疗选药。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能,也是使用抗菌药物治疗前必不可少的一道环节。

测定抗菌药物在体外对微生物有无抵制作用的方法称为药物敏感性实验,简称药敏实验。K-B法,即我们通常所说的纸片扩散药敏试验,是目前临床上最常用的药敏试验方法。其具备技术上简单易行,重复性好;试验成本相对较低,不需任何特殊设备;抗菌药物的选择有很大的灵活性;药敏结果解释性分类易理解等特点[1]。经典的药敏试验选择的是M-H培养基 [1],也有选择肉膏-胰胨培养基[2],而关于LB培养基应用于药敏试验鲜有报告。本文以安徽省滁州市某水库发病的鳊鱼为例,就LB培养基应用于药敏试验做一探讨。

二.快速药敏实验意义

1.2因为快速药敏实验在体外进行,操作相对简单,成本相对较低,既经济又快速有效,可以对流行病学调查进行监控,控制和预防耐药菌株的流行。

二、药敏试验的意义

材料与方法:

在疫病的诊断和防治中,应在细菌分离鉴定的同时,先进行药敏试验,及时指导养殖户进行有效防治。这种快速药敏试验方法在操作的规范性、结果的准确性等方面虽存在一定差异,但能及早为防治提供依据,控制疫病,减少死亡,为控制疫病赢得时间。在生产中具有非常重要现实意义。

二.快速药敏实验意义

1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性,指导临床合理用药。因为实验是在体外对已经分离的细菌进行药敏,不需要生物载体,不需要实验动物,操作相对简单,成本相对降低。是一种既经济又有效的方法。

1.1 材料

三.快速药敏实验操作步骤

在疫病的诊断和防治中,应在细菌分离鉴定的同时,先进行药敏试验,及时指导养殖户进行有效防治。这种快速药敏试验方法在操作的规范性、结果的准确性等方面虽存在一定差异,但能及早为防治提供依据,控制疫病,减少死亡,为控制疫病赢得时间。在生产中具有非常重要现实意义。

2、可以对流行病学调查进行监控,控制和预防耐药菌株的流行。因为随着新型致病菌的不断出现,各种致病菌对不同的抗菌药的敏感性不同,同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也有差异。进行有效的药敏试验可以及时掌握各种新型菌种和菌株的耐药性,对流行病学调查建立监控,同时采取相应的措施也就可以控制和预防耐药菌株的流行。

1.1.1 LB液体培养基[3]:蛋白胨1%,酵母膏1%,氯化钠0.5%,PH 7.2;121℃20min。 LB固体培养基:是在LB液体培养基的基础上加入1.5-2.0%的琼脂, 121℃20min。

3.1琼脂平板制备

三.快速药敏实验操作步骤

3、为临床用药提供参考依据。长期以来,由于各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药药效下降或消失。不能很好的掌握药物对细菌的敏感程度,不但造成药物浪费,而且还延误病情,给养殖户造成了很大的经济损失。所以在临床疾病防治工作中,要取得较好的治疗效果,应扩大常规抗菌药种类进行药敏试验,根据药敏试验结果,选择敏感药物,且应注意交替用药,按疗程投药,这样才能收到较好的治疗效果。

1.1.2 药敏试纸

按照营养琼脂干粉说明来进行稀释,稀释后琼脂放在微波炉里进行加热,加热后琼脂移至超净工作台中,静置待温度降至50℃(手指能接受的最高温度)左右时,开始倒平板,内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液,倒入后迅速混匀铺满平皿底部。

3.1琼脂平板制备

三、常用的药敏试验方法

1.1.3 0.5麦氏标准浊度[1]:将0.5ML0.048mol/l的BaCl2 加入到99.5ml0.18mol/l的H2SO4中并不断搅动,以维持混悬状态。

3.2药液及药敏纸片制备

按照营养琼脂干粉说明来进行稀释,稀释后琼脂放在微波炉里进行加热,加热后琼脂移至超净工作台中,静置待温度降至50℃(手指能接受的最高温度)左右时,开始倒平板,内径225px平皿每个平皿倒入约10ml琼脂液,倒入后迅速混匀铺满平皿底部。

兽医临床常用的药敏试验方法主要有两种,即扩散法和稀释法。其中扩散法属手工测试方法,通过测试药物纸片或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小,判断细菌对该种药物是否敏感。稀释法包括试管稀释法和微量稀释法,通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况,判断其最低抑菌浓度。

1.1.4 TTC溶液:0.4%TTC水溶液121℃20min灭菌备用。

3.2.1药液制备:按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。

3.2药液及药敏纸片制备

由于扩散法操作简单,成本低,已经被大多数实验室和基层单位所采用。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法,目前牛津杯法和打孔法在兽医临床已较少应用。以下简单介绍纸片法。

1.1.5 病鱼:取自安徽省滁州市某水库急性发病的鳊鱼。

3.2.2药敏纸片制备:要用质量较好的定性滤纸,用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中,以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后,置于37℃温箱或烘箱中一天,使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计,在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称,于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长,以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮,置阴暗干燥处或家用冰箱中保存,有效期4-6个月。

3.2.1药液制备:按药品使用说明书上的配料或饮水浓度配置按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。

1、药敏纸片的制作

1.2 方法

3.3病料接种

3.2.2药敏纸片制备:要用质量较好的定性滤纸,用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中,以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后,置于37℃温箱或烘箱中一天,使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计,在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称,于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长,以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮,置阴暗干燥处或家用冰箱中保存,有效期4-6个月。

纸片法中使用的药敏纸片目前市场上已有较多厂家的产品销售。但也可根据需要自制,具体自制的方法如下:

1.2.1 药敏平板的制作

取新鲜病料组织于超净工作台中或酒精灯旁,剪取新鲜组织断面无菌涂抹到营养琼脂板上,涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,保证涂布均匀。

3.3病料接种

取质量较好的定性滤纸,用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中,以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后,置于37℃温箱或烘箱中数天,使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计,在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml,不时翻动,使滤纸片将药液均匀吸净,一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称,于37℃温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长,以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮,置阴暗干燥处或家用冰箱中保存,有效期4-6个月。

1.2.1.1 LB药敏平板:

3.4贴药敏纸片

取新鲜病料组织于超净工作台中或酒精灯旁,剪取新鲜组织断面无菌涂抹到营养琼脂板上,涂布整个琼脂平板表面,反复涂布几次,保证涂布均匀。

2、药液的制备

将灭过菌的LB固体培养基在无菌操作台中当培养基冷到60℃左右时,倒平板(90mm培养皿,每皿注入培养基约20 ml)晾干备用。

用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压,使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果,要求药敏纸片均匀分布于培养基上,位置安排适中,防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中央贴一片,外周等距离贴7-9片。记住每种药敏纸片的名称。

3.4贴药敏纸片

自制药敏纸片时还需自行配制抗菌药液。抗菌药的稀释剂通常用蒸馏水。一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度,按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料,就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料,其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。

1.2.1.2 TTC显色药敏平板:

3.5温箱培养

用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压,使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果,要求药敏纸片均匀分布于培养基上,位置安排适中,防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中央贴一片,外周等距离贴7-9片。记住每种药敏纸片的名称。

3、试验操作方法

将灭过菌的LB固体培养基在无菌操作台中当培养基冷到60℃左右时,加入0.4% TTC水溶液0.6ml/100ml与培养基混合均匀,然后倒平皿(90mm培养皿,每皿注入培养基约20 ml)晾干备用。

贴完药敏纸片的平皿倒放在37℃恒温箱中培养24小时以上。

3.5温箱培养

在超净工作台中或酒精灯旁,用无菌棉签或经酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将菌液均匀涂布到平皿中的固体培养基表面。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压,使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果,要求药敏纸片均匀分布于培养基上,位置安排适中,防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm,可在平皿中央贴一片,外周等距离贴5-6片。记住每种药敏纸片的名称。贴完纸片的平皿15分钟后再置于37℃温箱中培养16-24小时,观察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈,根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。

1.2.2 麦氏标准管的制作[1]

四.药敏实验结果观察

贴完药敏纸片的平皿倒放在37℃恒温箱中培养24小时以上。

实践证明,利用自制药敏纸片进行药敏试验,可以灵活选药,与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场药品范围内或本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物。还可在短时间内选择最佳药品和最佳剂量,既能缩短病程,又能避免盲目用药,减少浪费。

将0.5麦氏标准浊度液的的正确浓度应光径为1cm,并配有合适比色杯的分光光度计来核实,0.5麦氏标准在625nm处的吸光度值应为0.08-0.1;按每管4-6ml将硫酸钡悬液分装于带旋盖的管子中,管子的大小应与培养或稀释接种菌所用的管子一致,标准浊度管应密封并贮存于室温暗处,使用前宜于旋转混匀器上剧烈震荡,目测其外观浊度应均匀一致。

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四.药敏实验结果观察

四、根据药敏试验选药原则

1.2.3 K-B纸片法的具体步骤为[1]:

五.药敏实验选药原则

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完成药敏试验后,应根据结果选择敏感性较高,同时价廉、易得、安全的药物进行治疗,以减少耐药菌株,同时还应注意以下原则:

用医用棉鉴将麦氏比浊度为0.5的受试菌液0.2ml均匀涂布于含有TTC的LB琼脂平皿表面(均匀涂抹3次,每次涂抹时转动角度60°,注意不要将琼脂划破),待菌液被完全吸收后,将同一批次的含有一定浓度抗菌药物的含药纸片均匀贴于已接种菌液的LB琼脂平板表面(各药片中心距离应大于24mm,纸片距平板内缘应大于15mm.见图示1),36±1℃恒温培养箱中倒置培养4-9h,直至抑菌圈清晰为止,用游标卡尺或直尺量取受试菌的抑菌圈直径,然后与参考标准进行比较来判定受试菌的药敏结果。

5.1在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触,而在给畜禽用药时,必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效,所以在给畜禽用药时,高敏药物一定要配合适宜的给药方法,并予以足够剂量、足够疗程,才会取得好的治疗效果。

五.药敏实验选药原则

1、在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触,而在给畜禽用药时,必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效,所以在给畜禽用药时,高敏药物一定要配合适宜的给药方法,并予以足够剂量、足够疗程,才会取得好的治疗效果。

直接药敏试验[4]:

5.2药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响,药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70-80%,所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现疗效不显著应及时换药。

5.1在选择高敏药物时还应考虑药物的吸收途径。因为药敏试验是药液直接和细菌接触,而在给畜禽用药时,必须通过机体的吸收才能使药物发挥疗效,所以在给畜禽用药时,高敏药物一定要配合适宜的给药方法,并予以足够剂量、足够疗程,才会取得好的治疗效果。

2、药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响,药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70-80%,所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现疗效不显著应及时换药。

用70%的酒精棉球擦拭病鱼体表,用消毒过的解剖剪,分别取肝脏和肾脏等组织匀浆液0.2ml涂药敏平板,按K-B纸片法的具体步骤做药验试验。

5.3药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现,细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此,定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。

5.2药敏试验结果仅为临床选择高敏药物的参考。因动物机体及环境等因素影响,药物的药敏试验与临床治疗效果的符合率一般为70-80%,所以也不能过分地依赖药敏试验。如发现疗效不显著应及时换药。

3、药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现,细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此,定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。

1.2.5 富集培养药敏法**

5.4窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素,一种抗生素可达到治疗作用时,不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时,应选择联合应用具有协同作用的药物。

5.3药敏试验确定的首选药物不是一成不变。随着药物使用频率的增加及新特药的不断出现,细菌对原先的高敏感药物可能不再敏感。因此,定期进行药敏试验了解本场细菌对抗菌药的敏感性情况是很有必要的。

4、窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素,一种抗生素可达到治疗作用时,不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时,应选择联合应用具有协同作用的药物。

将鳊鱼病变的肾脏与肝脏组织匀浆液接种到装有LB液体培养基的试管或离心管中,36±1℃恒温培养箱中培养4-9h进行增菌培养后做药敏试验。

5.5避开已经使用过的药物或其同类药物,发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。

5.4窄谱抗生素能解决的问题不选广谱抗生素,一种抗生素可达到治疗作用时,不要用两种药物联合应用。必须应用两种抗生素时,应选择联合应用具有协同作用的药物。

5、避开已经使用过的药物或其同类药物,发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。

1.2.6 致病菌纯培养后的药敏情况:

六. 临床案例

5.5避开已经使用过的药物或其同类药物,发病期间已用过的药物或同类药物一般不用。

五、影响药敏试验结果的因素

通过稀释法,将纯培养后致病菌液的浓度调整到0.5麦氏比浊管浓度;取0.2ml涂药敏平板,按K-B纸片法的具体步骤做药验试验。

河南省开封市经销商送检奶样进行药敏实验。

六. 临床案例

在以纸片法进行药敏试验时,以下几方面因素可影响试验的结果:

2、试验结果:

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1、培养基:首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。培养基的成分的不同,不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。一般细菌,如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂;做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板;链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次,倾注平板时,厚度应合适,不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸能拮抗磺胺药和TMP的活性。

2.1直接法药敏试验结果:

药敏试验结果

河南省开封市经销商送检奶样进行药敏实验。

2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

表1、直接法药敏试验结果

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药敏试验结果

3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。

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结论分析

4、培养时间:一般细菌培养温度和时间为37℃12-24小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好药敏纸片的培养基先置4℃冰箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较明显的抑菌圈。

2.2富集法培养药敏试验结果

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依据药敏试验纸片法结果分析:该样品对1234、1196、9404奶样效果显著,对8178、1612效果不显著。

六、药敏试验存在的问题

表2、富集法培养药敏结果

结论分析

奶样4222、2354、9523、6558和8026细菌培养没有菌落,疑似奶牛临床用药抑制细菌生长。

当前进行药敏试验仍然存在一些问题,主要包括以下几方面:

依据药敏试验纸片法结果分析:该样品对1234、1196、9404奶样效果显著,对8178、1612效果不显著。

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1、方法学不统一,没有标准化。

2.3致病菌纯培养后药敏结果

奶样4222、2354、9523、6558和8026细菌培养没有菌落,疑似奶牛临床用药抑制细菌生长。

2、市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片等缺乏严格质控,质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。

表3、致病菌纯培养后药敏结果

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3、因需要先进行细菌的分离培养,所以药敏试验报告出结果时间长,检验与临床缺乏沟通,对于基层兽医站或养殖场,药敏结果不能满足临床治疗要求,容易延误治疗时机。但根据有关报道,也可进行简易的药敏试验,方法如下:无菌取病死畜禽的部分肝、脾等组织,按1:5加生理盐水研磨制成悬液,静置5分钟,用无菌吸管吸悬液,加两滴于营养琼脂板上,涂布均匀,5分钟后贴上药敏试纸,培养、观察抑菌圈大小。

4、对于部分营养需求较高的细菌或微生物,如链球菌和支原体,临床上较难培养,限制了药敏试验的应用。

2.4 根据抑菌圈试验结果,并具体针对不同的抗生素、菌株参考NCCLS标准或CSLI标准,做出判断。

5、部分养殖场或基层兽医站缺乏做细菌分离培养和药敏试验的意识。绝大多数养殖者或技术人员是在没有明确微生物学诊断的情况下使用抗菌药物,养殖场规模越小,细菌培养和药敏试验做的越少,有的养殖场轮翻使用多种抗菌药物而不做细菌培养和药敏试验,致使疗效不佳,治疗时机延误和药品的浪费。一些病例用药前不做药敏试验,而是在大量使用多种抗菌药物疗效不明显时才想起做细菌培养和药敏试验,而此时细菌已对多种抗菌药产生耐药性。

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小结:试验证明药敏试纸环丙氟派酸、诺氟沙星、氧氟沙星、复方新诺明、四环素、痢特灵敏感度最高,但环丙氟派酸、红霉素属于禁止用渔药,可选择其他几种药物使用。实践选用了推荐药物中的诺氟沙星拌料投喂后两天便控制了病情,效果显着!

3.1 不同TTC浓度对结果的影响:笔者在用显色药敏平板前曾做过预试验使其培养基中TTC的浓度分别为0、0.0008%、0.0016%、0.0024%、0.0032%、0.0040%、0.0048%,发现0.0024%效果最明显,既可使着色菌落染成明显红色,又可保证菌落数与对照平皿菌落数相接近[5],而0.0032%、0.0040%、0.0048%有抑制作用。

3.2 通过用直接法药敏试验和富集法培养药敏试验、致病菌纯培养后药敏试验,结果发现这三种方法试验结果无差异,以后在实践中可根据需要灵活运用。

细菌耐药速度的快速增长是当今社会的一大难题, 预防因盲目用药引起的耐药菌株的产生, 配合临床尽快准确用药, 降低渔业生产损失,实验室的快速药敏报告显得尤为重要!此项技术简单易行,不需要特殊的仪器设备,重复性好[1]!特建议为鱼病室常规检测,这将针对性指导渔业生产用药,降低生产用药成本与预防由于乱用药而导致的抗药性,将起到重要作用,是目前鱼病防治比较快速、有效的方法,应该积极的推广的生产当中去。

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